- practica 1 y 2
etapa analitica
- practica 3
- practica 4
- practica 5
- practica 6
- practica 7
etapa post-analitica
- practica 8
- practica 9
martes, 23 de junio de 2009
etapas de las practicas
etapa pre-analitica
practica 8
PRACTICA 8
PRUEBA DE AGLUTINACION
MÉTODO DE PRUEBA RÁPIDA EN PLACA. Ejemplo de técnicaa) Al paciente se le realiza una venopunción, extrayendo la sangre en un tubo sin anticoagulante (Tapón rojo), y es centrifugada por 10 minutos a 3000 revoluciones por minuto. Se separa el suero el cual se utiliza para la determinación de los anticuerpos (puede extraerse con pipetas semiautomáticas).
Marcar en una placa de vidrio correctamente indicando el antígeno que se esté usando:(En este caso serian los antígenos):Tífico “O” - Salmonella typhi; Antígeno somático, pH: 6.5 ± 1.0Tífico “H” - Salmonella typhi; Antígeno flagelar, pH: 6.5 ± 1.0
NOTA: El reactivo así como los sueros, deben alcanzar la temperatura ambiente para comenzar la prueba.
PROCEDIMIENTO:1. Depositar en sitios diferentes de la placa las siguientes cantidades del suero a analizar: 0.08mL, 0.04mL, 0.02mL, 0.01mL y 0.005 mL (EL SUERO DEBE ESTAR TOTALMENTE CLARO).2. Agitar el antígeno a utilizar para tener una suspensión uniforme.3. Añadir 30 mL de la suspensión de antígeno a cada una de las diferentes cantidades de suero. Se recomienda utilizar pipetas automáticas (el gotero incluido proporciona una gota de 30-40 mL).4. Mezclar el antígeno y el suero utilizando un aplicador diferente para cada una de las cantidades de suero.5. Girar la placa manualmente o utilizando un agitador mecánico (120 rpm) durante 2 minutos.6. Realizar la lectura utilizando una fuente de luz directa y observar la aglutinación macroscópica.7. Se recomienda incluir controles Positivo y Negativo.
INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOSEl grado de aglutinación se registra como sigue:
4+ Aglutinación del 100% de los organismos3+ Aglutinación del 75% de los organismos2+ Aglutinación del 50% de los organismos1+ Aglutinación del 25% de los organismos- Aglutinación del 0% de los organismos
LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO1. Algunos sueros normales pueden dar un titulo de 1:20 a 1:40 y hasta 1:80 pero esto puede ser debido a vacunaciones o alguna infección anterior. No siempre se presenta producción de aglutininas en infecciones bacterianas.2. Se pueden producir reacciones cruzadas de aglutininas debido a vacunaciones para ciertas enfermedades. La vacuna tífica puede producir aglutininas contra antígenos Proteus.3
CONCLUSIÓN:El diagnóstico exacto de la enfermedad depende del acercamiento entre el laboratorio clínico y el médico, ya que la elevación del título en la muestra de suero con sintomatología reciente y la muestra de suero en fase convaleciente indicará la exactitud del diagnóstico. El paciente con salmonelosis cursa con un cuadro donde aparecen escalofríos , cefalea, náuseas, anorexia, tos y diarrea o estreñimiento. La fiebre es prolongada y varía de 38,5ºC a 40ºC. Entre un 20-40% presentan dolor abdominal. Se sugiere que se le realice al paciente un coprocultivo (cultivo de las heces fecales). Debe crecer salmonella, identificándose la especia por medio de pruebas bioquímicas.
Marcar en una placa de vidrio correctamente indicando el antígeno que se esté usando:(En este caso serian los antígenos):Tífico “O” - Salmonella typhi; Antígeno somático, pH: 6.5 ± 1.0Tífico “H” - Salmonella typhi; Antígeno flagelar, pH: 6.5 ± 1.0
NOTA: El reactivo así como los sueros, deben alcanzar la temperatura ambiente para comenzar la prueba.
PROCEDIMIENTO:1. Depositar en sitios diferentes de la placa las siguientes cantidades del suero a analizar: 0.08mL, 0.04mL, 0.02mL, 0.01mL y 0.005 mL (EL SUERO DEBE ESTAR TOTALMENTE CLARO).2. Agitar el antígeno a utilizar para tener una suspensión uniforme.3. Añadir 30 mL de la suspensión de antígeno a cada una de las diferentes cantidades de suero. Se recomienda utilizar pipetas automáticas (el gotero incluido proporciona una gota de 30-40 mL).4. Mezclar el antígeno y el suero utilizando un aplicador diferente para cada una de las cantidades de suero.5. Girar la placa manualmente o utilizando un agitador mecánico (120 rpm) durante 2 minutos.6. Realizar la lectura utilizando una fuente de luz directa y observar la aglutinación macroscópica.7. Se recomienda incluir controles Positivo y Negativo.
INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOSEl grado de aglutinación se registra como sigue:
4+ Aglutinación del 100% de los organismos3+ Aglutinación del 75% de los organismos2+ Aglutinación del 50% de los organismos1+ Aglutinación del 25% de los organismos- Aglutinación del 0% de los organismos
LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO1. Algunos sueros normales pueden dar un titulo de 1:20 a 1:40 y hasta 1:80 pero esto puede ser debido a vacunaciones o alguna infección anterior. No siempre se presenta producción de aglutininas en infecciones bacterianas.2. Se pueden producir reacciones cruzadas de aglutininas debido a vacunaciones para ciertas enfermedades. La vacuna tífica puede producir aglutininas contra antígenos Proteus.3
CONCLUSIÓN:El diagnóstico exacto de la enfermedad depende del acercamiento entre el laboratorio clínico y el médico, ya que la elevación del título en la muestra de suero con sintomatología reciente y la muestra de suero en fase convaleciente indicará la exactitud del diagnóstico. El paciente con salmonelosis cursa con un cuadro donde aparecen escalofríos , cefalea, náuseas, anorexia, tos y diarrea o estreñimiento. La fiebre es prolongada y varía de 38,5ºC a 40ºC. Entre un 20-40% presentan dolor abdominal. Se sugiere que se le realice al paciente un coprocultivo (cultivo de las heces fecales). Debe crecer salmonella, identificándose la especia por medio de pruebas bioquímicas.
practica 7
PRACTICA 7
Observacion microscopica
La laminilla ya preparada y lista se monta en el microscopio se asegura
Con las pinsas de la platina y se observa a 100 x donde encontramos bacterias en binas esfericas en formas de baston y que ambas las podemos encontrar de 1 hasta 4 piezas desde separadas y juntas, en cadena.
Materiales.
Porta objeto teñido
Aceite de inmercion
Observacion microscopica
La laminilla ya preparada y lista se monta en el microscopio se asegura
Con las pinsas de la platina y se observa a 100 x donde encontramos bacterias en binas esfericas en formas de baston y que ambas las podemos encontrar de 1 hasta 4 piezas desde separadas y juntas, en cadena.
Materiales.
Porta objeto teñido
Aceite de inmercion
practica 5
frotis
Se denomina frotis a la extensión que se realiza sobre un portaobjetos de una muestra o cultivo con objeto de separar lo más posible los microorganismos, ya que si aparecen agrupados en la preparación es muy difícil obtener una imagen clara y nítida. Este frotis debe ser posteriormente fijado al vidrio del portaobjetos para poder aplicar los métodos habituales de tinción que permiten la observación al microscopio de las bacterias sin que la muestra sea arrastrada en los sucesivos lavados. La fijación de una extensión bacteriana hace que las bacterias queden inactivadas y adheridas al vidrio alterando lo menos posible la morfología y bacteriana y las posibles agrupaciones de células que pudiera haber.
Colocar una pequeña gota de agua en el centro de un portaobjetos limpio. Es necesaria muy poca cantidad de agua, por lo que se puede usar el asa de siembra, ya que en el extremo curvo de su filamento queda retenida una mínima gota de agua, que resulta suficiente.
Flamear el asa de siembra, tomar, en condiciones asépticas, una pequeña cantidad del cultivo bacteriano en medio sólido y transferirlo a la gota de agua. Remover la mezcla con el asa de siembra hasta formar una suspensión homogénea que quede bastante extendida para facilitar su secado.Si la muestra se toma de un cultivo en medio líquido, no es necesario realizar los dos primeros pasos ya que basta con colocar y extender una gota de la suspensión bacteriana, que se toma con el asa de siembra, directamente sobre el portaobjetos.
Esperar hasta que el líquido se evapore o acelerar su evaporación acercando el porta a la llama del mechero. En este caso hay que tener mucha precaución de no calentar demasiado el porta pues las células pueden deformarse o romperse. 
Se denomina frotis a la extensión que se realiza sobre un portaobjetos de una muestra o cultivo con objeto de separar lo más posible los microorganismos, ya que si aparecen agrupados en la preparación es muy difícil obtener una imagen clara y nítida. Este frotis debe ser posteriormente fijado al vidrio del portaobjetos para poder aplicar los métodos habituales de tinción que permiten la observación al microscopio de las bacterias sin que la muestra sea arrastrada en los sucesivos lavados. La fijación de una extensión bacteriana hace que las bacterias queden inactivadas y adheridas al vidrio alterando lo menos posible la morfología y bacteriana y las posibles agrupaciones de células que pudiera haber.
Colocar una pequeña gota de agua en el centro de un portaobjetos limpio. Es necesaria muy poca cantidad de agua, por lo que se puede usar el asa de siembra, ya que en el extremo curvo de su filamento queda retenida una mínima gota de agua, que resulta suficiente.
Flamear el asa de siembra, tomar, en condiciones asépticas, una pequeña cantidad del cultivo bacteriano en medio sólido y transferirlo a la gota de agua. Remover la mezcla con el asa de siembra hasta formar una suspensión homogénea que quede bastante extendida para facilitar su secado.Si la muestra se toma de un cultivo en medio líquido, no es necesario realizar los dos primeros pasos ya que basta con colocar y extender una gota de la suspensión bacteriana, que se toma con el asa de siembra, directamente sobre el portaobjetos.
Esperar hasta que el líquido se evapore o acelerar su evaporación acercando el porta a la llama del mechero. En este caso hay que tener mucha precaución de no calentar demasiado el porta pues las células pueden deformarse o romperse.
practica 4
Practica #4
Observacion macroscopica
Mesa 4
2lv(m)
28/05/09
1-Nombre del medio: agar salmonella y shiga.
Nombre de la siembra: siembra de sigsne
Nombre de la muestra: sangre sentrifugada
Observaciones:en este medio no a habido resultados de colonias mas que
Vapor de agua .28/05/09.1:56pm
2- Nombre del medio: agar verde brillante
Nombre de la siembra: siembra por dispersión
Nombre de la muestra: orina (no centrifugada)
Observacuiones: no hubo resultados solo las marcas de la siembra. 28/05/09. 2:02pm
3- Nombre del medio: agar de hierro de kligler
Nombre de la siembra: siembra de tapis
Nombre de la muestra: h2o de lechuga
Observaciones: en esta caja hubo crecimiento de ongos de la lechuga. 28/05/09. 2:08pm
Observacion macroscopica
Mesa 4
2lv(m)
28/05/09
1-Nombre del medio: agar salmonella y shiga.
Nombre de la siembra: siembra de sigsne
Nombre de la muestra: sangre sentrifugada
Observaciones:en este medio no a habido resultados de colonias mas que
Vapor de agua .28/05/09.1:56pm
2- Nombre del medio: agar verde brillante
Nombre de la siembra: siembra por dispersión
Nombre de la muestra: orina (no centrifugada)
Observacuiones: no hubo resultados solo las marcas de la siembra. 28/05/09. 2:02pm
3- Nombre del medio: agar de hierro de kligler
Nombre de la siembra: siembra de tapis
Nombre de la muestra: h2o de lechuga
Observaciones: en esta caja hubo crecimiento de ongos de la lechuga. 28/05/09. 2:08pm
4- Nombre del medio: agar de mac conkey
Nombre de la siembra: siembra exagonal
Nombre de la muestra: muestra interdental
Observación: en esta muestra hay pequenos puntitos de caries.28/05/09. 2:9pm
5- Nombre del medio: agar dextosa
Nombre de la siembra: siembra por estrias
Nombre de la muestra: raspado de pies
Observación: vapor de h2o y pequenas manchitas 28/05/09
Desarrollo
El día 28 de mayo del 2008 observamos a simple vista las siembras y tomamos no ta de cada una de allas. Nosotros como alumnos debemos observar como estan las colonias de bacteriasque crecen de 24 a 72 hrs. Fueron 2 que no tubieron resultados de crecimiento el día 29 de mayo del 2008
Nombre de la siembra: siembra exagonal
Nombre de la muestra: muestra interdental
Observación: en esta muestra hay pequenos puntitos de caries.28/05/09. 2:9pm
5- Nombre del medio: agar dextosa
Nombre de la siembra: siembra por estrias
Nombre de la muestra: raspado de pies
Observación: vapor de h2o y pequenas manchitas 28/05/09
Desarrollo
El día 28 de mayo del 2008 observamos a simple vista las siembras y tomamos no ta de cada una de allas. Nosotros como alumnos debemos observar como estan las colonias de bacteriasque crecen de 24 a 72 hrs. Fueron 2 que no tubieron resultados de crecimiento el día 29 de mayo del 2008
practica 3
Desarrollo de practica 3
Sembrado del medio
Primero sacamos 2 mecheros y los colocamos en el campo de esterilización
Para inclinar las cajas petris y comenzar a poner las muestras que son las siguientes:
Orina
Sangre
H2o de lechuga
Raspado de pie
Muestra interdental
Ya teniendo estas muestras, las colocamos en el medio de cultivo y empezamos abrirlas para colocar las muestras en cada caja petri.
Materiales:
-5 o 7 cajas petri de medio de cultivo.
-Asa bacteriologica
-Vaso de precipitado con 25ml. de agua destilada.
-2 mecheros de bunsen
-Papel para mesa de laboratorio
-Tape
-Algodon secoAlgodones con alcohol
-Tubo conico de plastico
Muestras para siembras:
-Saliva
-Muestra interdental
-Orina
-Agua preparada
-Verduras
-Muestra de sangre
Tecnica de extraccion sanguinea:
Materiales:
-Jeringa 5ml.
-Torundas de algodon alcoholosadas
-Torniquete
Se realiza asepxia y antisepxia del pliegue del brazo utilizando una torunda de algodon con alcohol.Una vez realizado se debe asegurar la aguja a la jeringadandole un pequeño giro hasta que quede apretado. Una vez lista la jeringa y limpia la zona del pliegue se aplica el torniquete en la parte media del brazo para hacer precion t obtener una vaso dilatacion del conducto sanguineo, se intruduce la jeringa y se extraen 2.5ml. de sangre la que depositaremos en un tubo con tapon rojo sin anticuagulante.No se retita el tapon del tubo se introduce la aguja en el.Se deja coagular la sangre y se toma el tiempo se mete a la centrifuga para separar el paquete del plasma.Una vez separado el paquete del plasma se trasvasa a un tubo de ensaye vacio.Se sembrara el liquido plasmatico en medio de cultivo utilizando la tecnica con varilla de cristal denominada siembra por dispercion.
Sembrado del medio
Primero sacamos 2 mecheros y los colocamos en el campo de esterilización
Para inclinar las cajas petris y comenzar a poner las muestras que son las siguientes:
Orina
Sangre
H2o de lechuga
Raspado de pie
Muestra interdental
Ya teniendo estas muestras, las colocamos en el medio de cultivo y empezamos abrirlas para colocar las muestras en cada caja petri.
Materiales:
-5 o 7 cajas petri de medio de cultivo.
-Asa bacteriologica
-Vaso de precipitado con 25ml. de agua destilada.
-2 mecheros de bunsen
-Papel para mesa de laboratorio
-Tape
-Algodon secoAlgodones con alcohol
-Tubo conico de plastico
Muestras para siembras:
-Saliva
-Muestra interdental
-Orina
-Agua preparada
-Verduras
-Muestra de sangre
Tecnica de extraccion sanguinea:
Materiales:
-Jeringa 5ml.
-Torundas de algodon alcoholosadas
-Torniquete
Se realiza asepxia y antisepxia del pliegue del brazo utilizando una torunda de algodon con alcohol.Una vez realizado se debe asegurar la aguja a la jeringadandole un pequeño giro hasta que quede apretado. Una vez lista la jeringa y limpia la zona del pliegue se aplica el torniquete en la parte media del brazo para hacer precion t obtener una vaso dilatacion del conducto sanguineo, se intruduce la jeringa y se extraen 2.5ml. de sangre la que depositaremos en un tubo con tapon rojo sin anticuagulante.No se retita el tapon del tubo se introduce la aguja en el.Se deja coagular la sangre y se toma el tiempo se mete a la centrifuga para separar el paquete del plasma.Una vez separado el paquete del plasma se trasvasa a un tubo de ensaye vacio.Se sembrara el liquido plasmatico en medio de cultivo utilizando la tecnica con varilla de cristal denominada siembra por dispercion.
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